همه چیز از همه جا
جدیدترین اخبار روز ، دانلود آهنگ جدید ، دانلود جدیدترین فیلم ها و سریال ها ، دانلود عکس و مقاله ، دانلود نرم افزارهمه چیز از همه جا
جدیدترین اخبار روز ، دانلود آهنگ جدید ، دانلود جدیدترین فیلم ها و سریال ها ، دانلود عکس و مقاله ، دانلود نرم افزارترکیب ایمونو بلاتینگ با تصویربرداری سه بعدی
به گفته Mark Tessier-Lavigne (نویسنده ارشد مطالعه در دانشگاه Rockefeller): امروزه به تکنیک های تصویر برداری حجمی علاقه بخصوصی وجود دارد به نحوی که میکروسکوپ ها و کامپیوترها بیشتر و بیشتر قدرتمند تر شده اند و قادر هستند که به مجموعه داده های بزرگ دست پیدا کنند.
Tessier-Lavigne و تیم اش برای اولین بار به طور سیستماتیک روش های ایمونوبلاتینگ سراسری را به منظور رسیدن به بهترین نسبت سیگنال به نویز و عمیق ترین نفوذ بافتی در زمان مناسب و در بافت های متعدد مورد تست و اصلاح قرار دادند.
محققین بعد از ارزیابی روش های پاکسازی اخیر، به خاطر سرعت، سادگی و پاکسازی بسیار عالی و سازگاری با immunolabeling تصمیم گرفتند که بر روی 3DISCO متمرکز شوند. محققان با ترکیب روش های اصلاح شده immunolabeling کلی و پاکسازی 3DISCO ، روش iDISCO (immunolabeling-enabled 3D imaging of solvent-cleared organs) را ایجاد کردند.
Renier (همکار نویسنده) می گوید: ما با تصویربرداری عصب پوست در جنین شروع به توسعه پروتکل خود کردیم، با این حال از اینکه می توانیم به طور مداوم محدودیت در اندازه و چگالی نمونه ها را رد کنیم، شگفت زده شدیم.
Tessier-Lavigne و تیم تحقیقاتیش با استفاده از تکنیک جدید شان انواعی از آنتی ژن ها را در ساختارهای عصبی و غیر عصبی از قبیل کلیه، ماهیچه و معده و درتعداد زیادی جنین و بزرگسال شناسایی کردند. آنها همچنین سلول های در حال تکثیر، آکسون و گزارش دهنده فعالیت عصبی را مشاهده و انحطاط عصبی را مورد مطالعه قرار دادند. همچنین آنها برای هر آنتی بادی داده شده دریافتند که کیفیت ایمونبلاتینگ مشاهده در مقاطع بافتی، کیفیت مشاهده شده با ایمونوبلاتینگ کلی با استفاده از iDISCO را پیش بینی می کند.
اما چند نکته وجود دارد. Renier می گوید: ضعف رویکرد ما اتکا به آنتی بادی است و در نتیجه موفقیت آن هم بستگی به ویژگی و کیفیت آنتی بادی اولیه دارد که می تواند غیر قابل پیش بینی بوده و از دسته ای به دسته ای دیگر متفاوت باشد. علاوه بر این، انقباض ناشی از دهیدراتاسیون بافت iDISCO برای اندازه گیری فاصله یا حجم مطلق نیاز به صحت دارد و نویسندگان برای مقابله با چالش های مرتبط با کسب داده ها و پردازش آنها توصیه می کنند که از یک میکروسکوپ light-sheet microscope برای تصویربرداری حجمی استفاده کنید.
با وجود این چالش ها، این روش به طور بالقوه می تواند در سطح وسیعی مورد استفاده قرار گیرد. Zhuhao Wu می گوید: ما در حال حاضر در آزمایشگاه برای بسیاری از پروژه ها ازiDISCO استفاده می کنیم. این تکنیک اکثر روش های بافت شناسی ما را به روز کرده است.
منبع:
Nicolas Renier, Zhuhao Wu, David J. Simon, Jing Yang, Pablo Ariel, Marc Tessier-Lavigne. iDISCO: A Simple, Rapid Method to Immunolabel Large Tissue Samples for Volume Imaging. Cell Volume 159, Issue 4, p896–910, 6 November 2014. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2014.10.010