به گفته Mark Tessier-Lavigne (نویسنده ارشد مطالعه در دانشگاه Rockefeller): امروزه به تکنیک های تصویر برداری حجمی علاقه بخصوصی وجود دارد به نحوی که میکروسکوپ ها و کامپیوترها بیشتر و بیشتر قدرتمند تر شده اند و قادر هستند که به مجموعه داده های بزرگ دست پیدا کنند.
Tessier-Lavigne و تیم اش برای اولین بار به طور سیستماتیک روش های ایمونوبلاتینگ سراسری را به منظور رسیدن به بهترین نسبت سیگنال به نویز و عمیق ترین نفوذ بافتی در زمان مناسب و در بافت های متعدد مورد تست و اصلاح قرار دادند.
محققین بعد از ارزیابی روش های پاکسازی اخیر، به خاطر سرعت، سادگی و پاکسازی بسیار عالی و سازگاری با immunolabeling تصمیم گرفتند که بر روی 3DISCO متمرکز شوند. محققان با ترکیب روش های اصلاح شده immunolabeling کلی و پاکسازی 3DISCO ، روش iDISCO (immunolabeling-enabled 3D imaging of solvent-cleared organs) را ایجاد کردند.
Renier (همکار نویسنده) می گوید: ما با تصویربرداری عصب پوست در جنین شروع به توسعه پروتکل خود کردیم، با این حال از اینکه می توانیم به طور مداوم محدودیت در اندازه و چگالی نمونه ها را رد کنیم، شگفت زده شدیم.
Tessier-Lavigne و تیم تحقیقاتیش با استفاده از تکنیک جدید شان انواعی از آنتی ژن ها را در ساختارهای عصبی و غیر عصبی از قبیل کلیه، ماهیچه و معده و درتعداد زیادی جنین و بزرگسال شناسایی کردند. آنها همچنین سلول های در حال تکثیر، آکسون و گزارش دهنده فعالیت عصبی را مشاهده و انحطاط عصبی را مورد مطالعه قرار دادند. همچنین آنها برای هر آنتی بادی داده شده دریافتند که کیفیت ایمونبلاتینگ مشاهده در مقاطع بافتی، کیفیت مشاهده شده با ایمونوبلاتینگ کلی با استفاده از iDISCO را پیش بینی می کند.
اما چند نکته وجود دارد. Renier می گوید: ضعف رویکرد ما اتکا به آنتی بادی است و در نتیجه موفقیت آن هم بستگی به ویژگی و کیفیت آنتی بادی اولیه دارد که می تواند غیر قابل پیش بینی بوده و از دسته ای به دسته ای دیگر متفاوت باشد. علاوه بر این، انقباض ناشی از دهیدراتاسیون بافت iDISCO برای اندازه گیری فاصله یا حجم مطلق نیاز به صحت دارد و نویسندگان برای مقابله با چالش های مرتبط با کسب داده ها و پردازش آنها توصیه می کنند که از یک میکروسکوپ light-sheet microscope برای تصویربرداری حجمی استفاده کنید.
با وجود این چالش ها، این روش به طور بالقوه می تواند در سطح وسیعی مورد استفاده قرار گیرد. Zhuhao Wu می گوید: ما در حال حاضر در آزمایشگاه برای بسیاری از پروژه ها ازiDISCO استفاده می کنیم. این تکنیک اکثر روش های بافت شناسی ما را به روز کرده است.
منبع:
Nicolas Renier, Zhuhao Wu, David J. Simon, Jing Yang, Pablo Ariel, Marc Tessier-Lavigne. iDISCO: A Simple, Rapid Method to Immunolabel Large Tissue Samples for Volume Imaging. Cell Volume 159, Issue 4, p896–910, 6 November 2014. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2014.10.010
آپ چاگی : ضربه با سینه ی پا رو به جلو . (انیمیشن زیر)
موروپ چاگی : ضربه با زانوی خمیده.
آپ دولیو چاگی : ضربه با روی پا به پهلوی حریف.
دولیو چاگی : ضربه پا به صورت حریف همراه چرخش ۱۳۵ درجه ی پای زیر (چرخش زیاد پای زیری باعث پیچش تاندون می شود).(انیمیشن زیر)
پاکات نریو چاگی : ضربه ی مستقیم پا از داخل به خارج بدن.
آن پاکات نریو چاگی : ضربه ی مستقیم پا ازخارج به داخل بدن.
• حرکات اولیگی ، حرکاتی هستند که با زانوی صاف برای اعمال کشش به پا انجام می شوند.
آپ اولیگی: ضربه ی مستقیم پا تا روبروی صورت به منظور کشش
آپ چا اولیگی : ضربه ی مستقیم پا تا پشت گوش از پایین به بالا برای کشش پا.
یوپ اولیگی: کشش پا از پهلو به بالا با زانوی مستقیم.
یوپ چاگی : ضربه ی پا با تیغه ی پا بدون خمیدگی زانو و بدن در یک خط قرار گیرد.(انیمیشن زیر)
دیت اولیگی: کشیدن پا از پشت به بالا با زانوی صاف
دولیو اولیگی: بالا کشیدن پا از جلو و بردن آن به سمت کتف مخالف.
دولیو چاگی : ضربه پا به صورت حریف همراه چرخش ۱۳۵ درجه ی پای زیر (چرخش زیاد پای زیری باعث پیچش تاندون می شود).
وپ چاگی : ضربه با تیغه ی پا بطوری که پا یک مسیر رفت و برگشتی را طی می کند.
دولیو اولیگی : ضربه ی مستقیم پا بصورت ضربدری (رو به کتف مخالف).
دیت چاگی(تی چاگی) : چرخش بدن و ضربه با پاشنه ی پا به صورت کشویی.
باندا دولیو چاگی : ضربه ی دورانی پا با پاشنه به صورت حریف در مسیری افقی.
موم دولیو یوپ چاگی : چرخش بدن و زدن “یوپ چاگی”.
موم دولیو باندا دولیو چاگی : چرخش بدن و اجرای ضربه ی باندا دولیو چاگی.(تصویر زیر)
• اگر ضربات پا با پیشوند تیو آغاز شدند ، باید ضربه را بعد از کنده شدن از زمین و در هوا اجرا کنید. تمام ضربات زمینی را می توان بصورت تیو در هوا اجرا نمود.
مومو تیو یوپ چاگی : دویدن (سه گام) ، پرش و زدن ضربه ی یوپ چاگی در هوا همزمان با جمع کردن پای زیر.(تصویر زیر)
تیو یوپ چاگی : پرش در جا و زدن یوپ چاگی و جمع کردن پای زیر.
تیو آپ چاگی : پرش و زدن آپ چاگی با جمع پای زیر.
تیو تی چاگی : پرش و اجرای تکنیک تی چاگی در هوا.
تیو آپدولیو چاگی : پرش واجرای آپدولیو چاگی در هوا.
تیو دولیو چاگی : پرش و اجرای تکنیک دولیو چاگی .
تیو مومدولیو باندا دولیو چاگی : اجرای تکنیک مومدولیو باندا دولیو چاگی ٬ بعد از پریدن .
تیو باندا دولیو چاگی : پریدن و زدن ضربه ی باندا دولیو چاگی با پاشنه ی پا.
تیو پاکات نریو چاگی : پرش و زدن ضربه ی پاکات نریو چاگی.
تیو آن پاکات نریو چاگی : پرش و زدن ضربه ی آن پاکات نریو چاگی در هوا.
تیو مومدولیو پاکات نریو چاگی : پرش ٬ چرخش بدن در هوا و زدن ضربه ی پاکات نریو چاگی.
• اگر پیشوند نام ضربه ای “دوبادانگ سانگ” آمد یعنی بعد از پرش ٬آپ چاگی بزن و تکنیک بعدی را در همان پرش اجرا کن. همه ی ضربات زمینی را می توان بشکل دوبالدانگ سانگ اجرا کرد.
دوبالدانگ سانگ آپ چاگی : پرش ٬ زدن آپ چاگی با پای عقب و زدن آپ چاگی با پای دیگر.
دوبالدانگ سانگ دولیو چاگی: بپر ، با پای عقب آپ چاگی بزن ، بعد با پای بعدی دولیو چاگی را در هوا اجرا کن.
• ضربات زیر ، ضربات پرشی هستند که روی زمین معادل ندارد:
گاوی بال چاگی : پرش و زدن ضربه با سینه ی یک پا و زدن ضربه با تیغه ی پای دیگر به طرفین.
سان بال چاگی : پرش و زدن دو ضربه ی همزمان به طرفین با سینه ی پا.
مودوبال آپ چاگی : پرش وزدن دو ضربه ی آپ چاگی همزمان به جلو.
مودوبال یوپ چاگی: اجرای ضربه جفت پا از پهلو در هوا.